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人胚腎細胞293T細胞培養(yǎng)有哪些優(yōu)點?

更新時間:2023-06-16 瀏覽次數(shù):1480

  人胚腎細胞293T是一種廣泛應用于分子生物學、基因工程和病毒學等領域的細胞系。它來源于人類胚胎中的腎小管上皮細胞。

人胚腎細胞293T


       人胚腎細胞293T細胞培養(yǎng)的優(yōu)點如下:
  1、研究對象為活細胞
  在實驗中,可以根據(jù)需要保持細胞活力,并且可以長期監(jiān)測、檢測甚至定量評估一些活細胞的狀況,包括活細胞的形狀、結構和生命活動。
  2、研究條件可以人為控制
  pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學條件可根據(jù)實際需要人為控制。同時,可以應用化學、物理和生物因素作為實驗觀察的條件。這些因素也可以受到嚴格控制。
  3、研究樣本能達到比較均一
  經(jīng)過一定代數(shù)的細胞培養(yǎng),得到的細胞系可以達到均一,屬于同一類型的細胞。如有必要,可采用克隆等方法對細胞進行純化。
  4、研究內容易于觀察、檢測和記錄
  使用了各種研究技術,如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共聚焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等儀器設備。
 
  人胚腎細胞293T培養(yǎng)操作流程:
  1、培養(yǎng)基的制備及培養(yǎng)凍存條件:
  1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(rpmi-1640:gibco,貨號21875-091),90%;優(yōu)質胎牛血清為10%。
  2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度70%~80%。
  3)冷凍保存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)用,液氮保存。
  2、細胞處理:
  1)復蘇細胞:將含有1ml細胞懸液的凍存管放入37℃水浴中(水面應低于凍存管蓋),搖勻解凍,轉移至15ml離心管中,加入4ml培養(yǎng)基提前準備好,攪拌均勻。1000rpm離心4分鐘,棄上清,加入1ml培養(yǎng)基并吹勻。然后將所有細胞懸液轉移到含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中過夜培養(yǎng)。第二天,更換液體并檢查細胞密度。
  2)人胚腎細胞293T細胞培養(yǎng):細胞密度達到80%-90%即可培養(yǎng)。
 
  具有以下特點:
  1、高轉染率:由于其雙倍體狀態(tài),在轉染時比單倍體細胞更容易接受外源DNA并表達。
  2、適合制備重組腺病毒和慢病毒載體:可以高效地產(chǎn)生包含重組基因的腺病毒或慢病毒,使其成為常用的基因傳遞工具之一。
  3、廣泛應用于原代細胞文化:由于其穩(wěn)定性和不受質粘附影響而被廣泛用作原代細胞文化系統(tǒng)的對照,如神經(jīng)元、心肌等。
  4、容易獲取且無法再生:相較其他已知的能夠支持多次分裂生長的癌變標準株(如HeLa),293T不能連續(xù)無限度地進行傳代,所以不存在惡性增殖的風險。
 

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